產(chǎn)品詳情
僅供科研使用，不得用于臨床檢驗(yàn)。
貓胰島素(INS)定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）說(shuō)明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：貓胰島素(INS)定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）
英文名稱：Cat Insulin（INS） ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
48人份/盒，96人份/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用，定量檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中貓胰島素(INS)的濃度。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗貓胰島素(INS)抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入貓胰島素(INS)校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入另一株HRP標(biāo)記的抗貓胰島素(INS)抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測(cè)樣品中貓胰島素(INS)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中貓胰島素(INS)的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
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組分 |
數(shù)量 |
主要成分 |
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校準(zhǔn)品 |
0.5ml/管*6管 |
抗原配制的6個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品 |
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包被微孔板 |
96T |
預(yù)包被固相抗體 |
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HRP標(biāo)記抗體 |
6mL |
HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體 |
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底物液A |
6mL |
過(guò)氧化脲工作液 |
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底物液B |
6mL |
TMB工作液 |
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20×濃縮洗滌液 |
30mL |
含0.15%Tween20的PBS |
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說(shuō)明書 |
1份 |
-- |
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自封袋 |
1個(gè) |
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不干膠 |
2片 |
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校準(zhǔn)品濃度依次為： 800、400、200、100、50、0pg/mL。校準(zhǔn)品已經(jīng)通過(guò)測(cè)試，結(jié)果表明HBs抗原陰性，HIV1、HIV2和HCV抗體陰性，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒(méi)有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無(wú)粉一次性乳膠手套
8、質(zhì)控品（可從藍(lán)圖生物科技產(chǎn)品研發(fā)系統(tǒng)中選擇）
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個(gè)月。
2、開(kāi)封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開(kāi)封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為14天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過(guò)程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗(yàn)方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前，所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫30min，確保充分復(fù)溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。
8、如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測(cè)完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算機(jī)軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過(guò)樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋，通過(guò)上述方法測(cè)的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過(guò)期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測(cè)定。
6、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素。
7、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小于10pg/mL。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評(píng)估，回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組貓胰島素(INS)，與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉。
7、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。
售后電話：13559590085
