影響梯度高效液相色譜儀洗脫的因素

　　導(dǎo)讀：梯度高效液相色譜儀在進行多成分的復(fù)雜樣品分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。

　　影響梯度高效液相色譜儀洗脫的因素

　　梯度高效液相色譜儀進行洗脫時，選定溶劑A、B之后，設(shè)定梯度速度和梯度時間，確定梯度曲線形狀，要以最經(jīng)濟的梯度洗脫程序，實現(xiàn)樣品的最佳化分離。影響梯度洗脫的因素有：

　　1、溶劑的純度要高，否則會使梯度洗脫的重現(xiàn)性變壞。

　　2、梯度混合的溶劑互溶性要好，應(yīng)防止不互溶的溶劑進入色譜柱。

　　3、注意溶劑的粘度和密度對混合流動相組成的影響。

　　4、梯度洗脫應(yīng)使用對流動相組成變化不敏感的選擇型檢測器，而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器。

　　一、工作原理： 流動相由兩種（或多種）不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例而改變流動相的極性、PH值和離子強度，使每個流出的組分都有合適的容量因子，并使樣品的所有組分在最短時間內(nèi)實現(xiàn)最佳分離。

　　二、類型：

　　1、低壓梯度： 只需一臺高壓輸液泵，比例閥在泵之前，溶液在常壓（低壓）下混合。 簡單，經(jīng)濟，只需一個泵，所用溶劑的元數(shù)沒有限制。

　　2、高壓梯度： 采用兩臺高壓輸液泵，分別按設(shè)定的比例各輸送一種溶液至混合器，混合器在泵之后，兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。 流量精度高，溶劑的可壓縮性和熱力學(xué)體積的變化可能影響輸入色譜柱中溶劑的組成。

　　三、實現(xiàn)方式： 對于復(fù)雜樣品，線性梯度是最好的。 正相色譜中，常用二氯甲烷加入正己烷來實現(xiàn)。 反相色譜中，乙腈、甲醇加入水中是最常用的。

　　四、特點：

　　1、優(yōu)點： 分離復(fù)雜混合物，使所有組分都處在最佳的k值范圍內(nèi)。

　　2、缺點： 檢測器的使用受到限制，分析結(jié)果的重復(fù)性取決于流速的穩(wěn)定性，色譜柱需進行再生處理。